腺苷是由腺嘌呤和核糖通过β-N9糖苷键连接而成的核苷类化合物,主要来源于ATP代谢、S-腺苷同型半胱氨酸水解、腺嘌呤和1-磷酸核糖反应。比如,在生物机体内能量供给减少或消耗增加的时候,特别是缺氧、有炎症的情况下,ATP会逐渐脱去磷酸基团,先转化为ADP,再转化为AMP,最后在5-核苷酸酶的作用下脱去磷酸形成腺苷。因此,测定腺苷的含量在一定程度可体现机体能量消耗。
组成腺苷的腺嘌呤是一种含氮碱基,参与遗传信息的存储与转移。核糖是一种五碳糖,作为骨架结构,为腺苷的连接提供化学基础。嘌呤环和核糖结合,使其在细胞内能传递能量和调节生理功能。腺苷是合成ATP、腺嘌呤、腺苷酸等重要生物分子的中间体,参与能量转换和遗传信息传递。腺苷可以通过有机溶剂(极性溶剂,如水、甲醇等)从样品中提取出来,中间附加振荡、超声、离心等方法增加提取的效率。溶剂的比例决定了提取的效率,避免过度稀释。控制离心的转速如4000r/min,10min,确保蛋白充分沉淀。
腺苷分子中含有羟基和氨基等极性基团,易溶于水,是极性化合物。常用的流动相是甲醇、乙腈和水,其中,水的极性大于甲醇,其次是乙腈。因此,乙腈的极性是较弱的。用C18反相色谱柱,极性流动相(乙腈和水)分离,为了增强保留和改善峰形,需要添加0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液(pH4.5),等度洗脱。如果同时测多种组分,可用梯度洗脱,根据出峰的情况调节比例。紫外检测器,254nm波长。
检测腺苷含量的方法,除了液相色谱,还可以用液相串联质谱(LC-MS/MS)。