氨基酸及其衍生物是在分子中既含有氨基同时又含有羧基的一类化合物。蛋白质氨基酸是在蛋白质生物合成中,由专门的tRNA携带,直接参入到蛋白质分子之中,共22种:20种常见+2种不常见。它们具有相同的结构通式,差别在侧链基因(R基因);所有的生物体都含有常见的20种,2种不常见的蛋白质氨基酸。
研究意义:氨基酸不仅可以提供蛋白质的重要原料,也可以促进生长,为正常代谢、维持生命活动提供了物质基础。通过对多种氨基酸的准确检测,能全面准确的测定体内氨基酸平衡状态,揭示详细的氨基酸代谢状况。
氨基酸检测项目:
1.必需氨基酸8种:赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸。
2.人体能够合成,但不能满足正常需求的氨基酸,半必需氨基酸:组氨基酸和精氨酸。
3.极性中性氨基酸6种:丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、半胱氨酸、甲硫氨酸。
4.脂肪族氨基酸15种:甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸。
5.非必需氨基酸10种:甘氨酸、丙氨酸等。
通常情况下17种、18种,或20种检测项目。
检测方法:高效液相色谱(HPLC),液相色谱串联质谱(LC-MS/MS),液相色谱电感耦合等离体质谱(HPLC-ICP-MS)等。
检测的方法(HPLC)
1.水解:准确称0.2g,加入2ml 6mol/L HCL ,振荡混匀5min,105℃烘箱水解24h。取出冷却至室温。6mol/L NaOH溶液调节至中性,用水定容至5mL,振荡混匀5min,4000r/min离心10min,取上清液0.5ml衍生。
2.衍生:将0.5ml水解液,分别加入pH=9.0 碳酸氢钠缓冲溶液和DNFB各0.5ml,放入60±0.5℃水浴中,避光反应60min。取出,冷却至室温,加入3.5ml pH=7.0磷酸缓冲溶液,混匀,室温避光反应15min,取上清液过0.22μm 滤膜,待液相色谱测定。
3.色谱条件:C18的色谱柱,长250mm,内径4.6mm,粒径5um。柱温38℃。流动相:A:乙腈:甲醇=90:10 B:0.02mol/L磷酸二氢钠+磷酸氢二钠,梯度洗脱,流速1m/min,进样量10ul,UV或DAD检测器,波长360nm,仅供参考。
4.定量:标准曲线,5-7个点,回归方程计算含量。方法学验证。

研究类型:1.生物样品,如血液、血清,尿液,组织液等。2.中药材提取液,或其他植物样本。3.细胞和组织样本。4.菌类,蔬菜,奶类,谷物,海鲜等。5.动物,藻类。6.其他的如土壤等。
送样要求:动物组织/粪便100mg,细胞10^7,尿液/唾液/血样100ul,植物叶片2g,植物根茎1g,植物果实1-10g,微生物100mg,土壤5g,提取液100ul,鲜茶叶粉末/子实体30mg,乳液200ul。