植物甾醇分为3类:4-无甲基甾醇,4-甲基甾醇和4,4’-二甲基甾醇。科学研究植物中的甾醇种类和含量,具有重要的作用和意义。
植物的甾醇的检测意义:具有促进减少炎症,促进伤口愈合,增强毛细管循环等作用。提高巨噬细胞活性,增强免疫力。调节炎症因子(如TNF-α、IL-6)的表达,并清除自由基,减轻氧化应激损伤。调节皮肤的新陈代谢,防晒,抗老化。抑制胆固醇的吸收,降低总胆固醇和LDL水平。改善心血管中血液的流动相,降低疾病发生率。
植物甾醇化学结构:属于三萜烯类化合物,C3位连接羟基(-OH),C17位带有9-10个碳原子的脂肪族侧链。植物甾醇在C24位多出甲基或乙基的取代基。多数植物甾醇在C5-C6位存在双键,豆甾醇则在C22-C23之间有额外双键。植物甾醇既有疏水性,又有亲水性。具有环戊烷多氢菲甾核。C3位羟基可参与酯化反应,与脂肪酸形成 植物甾醇酯,也可与糖结合生成甾醇糖苷。
植物甾醇指标:豆甾醇、β-谷甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、β-谷甾烷醇、麦角甾醇等。
检测方法:高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)或气相质谱联用(GC-MS)
样品提取
精确称取约0.1g(精确到 0.0001g)样品,加入2ml 2mol/L KOH乙醇溶液,85℃水浴皂化1h,拿出冷却,加入1ml饱和氯化钠溶液,再加入5ml石油醚,振摇静置分层,转移有机层于一个新的离心管。重复萃取两次,合并三次有机层,加入5ml 超纯水洗涤,直至水层为中性即可,在向有机层加入无水硫酸钠去除多余水分,取全部有机层35℃氮气吹干,加入1mL正己烷,涡旋混匀,用0.22微孔滤膜过滤,待测。



以气相色谱(GC)为例,仪器条件
检测器:FID
载气:N2
色谱柱:安捷伦 HP-5(30m× 0.32mm×0.15μm),
进样口温度:300℃
检测器温度:320℃
H2流量:30mL/min
N2流量 30mL/min
空气流量:300mL/min,
柱箱:程序升温 初始温度 160℃保持 2min,然后以 15℃/min 升到280℃,保持 5min,以 5℃/min 升到300℃,保持 2min
流量:2.5ml/min
进样量: 1μL
分流比:10:1