植物黄酮类化合物主要来源于茶叶(如茶多酚),蔬菜或药材(黄酮及黄酮醇类,如槲皮素),裸子植物(双黄酮类),水果(花色甙类,如花青素),豆科植物(如大豆素等异黄酮、二氢异黄酮),玉米油类(二氢黄酮、二氢黄酮醇类)。
黄酮类化合物内含有酚羟基(-OH)而显酸性,酸性的强弱和羟基的位置和数量有关。黄酮的弱碱性源于γ-吡喃酮环的1位氧原子,它的孤对电子参与共轭。酚羟基显酸性,强度顺序:7,4-二羟基>7或4-羟基>一般羟基。黄酮类化合物在酸性条件下被Mg粉还原,生成红色至紫色的花色苷元衍生物。黄酮类化合物和金属盐(如Al3+)发生络合反应,生成有色的物质。黄酮类化合物以C6-C3-C6为基本骨架,由两个苯环通过三个碳原子连接形成。根据结构差异可分为黄酮、黄酮醇、异黄酮、黄烷酮、花青素等类型。
植物黄酮的极性取决于它的结构,苷元因平面型分子结构,分子间作用力强,通常为中等极性。苷类因糖基增加亲水性,极性显著增强。另外,羟基(-OH)提高极性,羟基越多,极性越强。甲氧基(-OCH3)降低极性。极性排序:花色素>黄酮醇>异黄酮>查尔酮>二氢黄酮。如果用C18反相色谱柱来吸附,极性越强,吸附作用越弱,在流动相的洗脱下越容易出来,出峰也是相对提前的。根据色谱柱的类型,使用推荐的进样量和流速,比如10ul,1ml/min。
如果要测多种黄酮类化合物,用甲醇和水或乙腈和水的流动相体系梯度洗脱,通过调节比例来改善分离度。如果是测单个黄酮类化合物,可以通过计算LogP值来反应亲脂性,数值越小极性越强,数据越大极性越弱。因为化合物中除了极性基团,还有非极性基团,就要通过公式来计算出整体的极性,从而判断出出峰的顺序。流动相的极性也是可以通过公式计算出来的,越接近化合物的极性,洗脱能力越强,可采用等度洗脱的方式分离。通过标准品来跑一次,知道化合物的出峰时间。当跑一次样品的时候,目标化合物的峰形是不确定的,可能比较完美,也可能会和周边的峰杂合在一起。知道调整到多少比例的流动相,可以尽可能的洗脱。黄酮类化合物,基本上都用紫外检测器,如254nm或280nm等。