中药材柴胡中可分离出来的皂苷亚型有a、b3、b4、c、d等，其中柴胡皂苷a和d具有重要的生理活性，可作为重点研究对象。柴胡皂苷的药理作用，主要包括保肝利胆、降低甘油三酯和胆固醇、免疫调节、解热镇痛、抗炎、抗氧化等。
柴胡皂苷d是一种三萜皂苷类化合物，化学结构是由苷元和糖链两个部分组成。其中，苷元部分含有13,28-氧环的柴胡皂苷元G，糖链部分是由β-D-半乳糖苷和6-脱氧-3-O-β-D-葡萄糖苷组成。由于分子中含有多个羟基，具有极性化合物的特性，易溶于水、稀醇、丁醇等极性溶剂，难溶于苯、氯仿等非极性溶剂。
C18反相色谱柱的固定相主要吸附非极性或弱极性的化合物，柴胡皂苷d具有极性化合物的特点，但也具有非极性的疏水基团（如糖基末端的甲基、亚甲基，甾烷类固醇核）。疏水基团可以结合到固定相的活性位点上用于吸附，乙腈和水为流动相，可以用等度洗脱（如45:55），根据出峰情况进行微调。如果同时测定多组分，可采用梯度洗脱。乙腈的紫外吸收截止波长低，洗脱能力比较强，且柱压低。柴胡皂苷d在210nm处有强的紫外吸收，需要确保基线稳定，避免溶剂干扰。柱温在30-40℃调整，减少保留时间的波动。
另外，如果要更准确的测定柴胡皂苷d的含量，需要采用LC-MS/MS。采用更细更短的色谱柱，粒径越小，分辨率越高。一般对化合物进行定量检测，采用多反应监测模式（MRM），用柴胡皂苷d的定性和定量离子对，识别处目标峰，并用标准曲线的方法，计算出柴胡皂苷d的含量。