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液相色谱测定绿原酸的含量

2025-10-22

绿原酸是一种天然多酚类化合物,在植物体内由咖啡酸和奎尼酸缩合而成的天然产物,主要来源于忍冬科植物(如金银花),另外还存在咖啡、茶、杜仲、水果和蔬菜等。绿原酸还是一种苯丙素类化合物,具有抗氧化、抗菌、降压、促进肠胃蠕动、提高中枢神经的兴奋性等多种作用。

绿原酸的分子机构中含有邻二酚羟基等极性基团,具有显著的极性特点,易溶于甲醇、水、丙酮等极性溶剂,难溶于石油醚、氯仿等非极性溶剂。绿原酸的邻二酚羟基(-OH)可通过长链烷基卤化物反应生成醚键,可显著降低它的极性。通过羧基酯化反应生成酯键,也可以降低极性。另外,通过引入疏水性的基团,如硅烷化修饰、水解后修饰等实现非极性的转化。

在反相色谱中,绿原酸作为极性化合物,它的保留时间随着流动相极性降低而缩短。这就是说,可以通过降低水相的比例,来增强绿原酸和C18色谱柱固定相的保留。在流动相洗脱过程中,避免使用磷酸盐等缓冲盐会增加极性,可改用甲酸等挥发性酸来调整pH值,在低pH值下绿原酸不容易发生解离,分子极性会降低保留时间延长。另外,0.1%的甲酸还能通过氢键的作用增强绿原酸和固定相和相互作用,从而提高保留能力。因此,看起来是极性的化合物,可以通过改变流动相的比例和添加酸的方式来改变极性,从而适用于C18反相色谱柱的吸附。另外,升高柱温也是一种方法,因为当温度升高时,会减弱极性溶剂和绿原酸的相互作用,从而倾向于和C18固定相的结合。

液相色谱测绿原酸含量时,流动相就会用乙腈/甲醇和水,并用0.1%的甲酸。如果单独测绿原酸,可以从70%水相(0.1%甲酸)-30%乙腈/甲醇。如果同时测多种化合物,可考虑从高比例水相开始,通过其他方式来调整绿原酸的保留时间。


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