多酚是植物次生代谢产物,具有苯环结构且结合多个羟基,这个特点很重要。它含有多个酚羟基(-OH)是极性的基团,呈亲水性。比如,儿茶素等,因为有羟基的存在,能够易溶于水、甲醇等极性溶剂。虽然分子结构中含有苯环等疏水结构,可能表现一定的脂溶性,酚羟基的强极性主导了它的水溶性。多酚的极性使其能通过氢键、疏水作用等与蛋白质、金属离子结合。羟基中的氧原子具有孤对电子,可作为配位体和金属离子(Fe3+,Cu2+,Al3+等)形成稳定的配位键,羟基邻位排列更容易和金属离子络合。
羟基(OH-)中的氧原子采用sp3杂化,有2对没有成家的孤对电子位于sp3杂化的轨道上,这些孤对电子具有较高的电子密度,可作为电子对供体,能和金属离子的空轨道行为配位键,结合在一起就成家了。金属离子的空轨道并不是那么容易就获得孤对电子芳心,需要它努力和孤对电子的能量接近,才能降低成键的壁垒。也不是说羟基的孤对电子什么都匹配的,配体(OH-)的空间构型需要和金属离子的配位环境匹配,也就是两个人的生活环境一致,有更多的共同话题,才能形成稳定的结构。
采用液相色谱测的话,C18的色谱柱固定相是疏水性的,那么怎么吸附到多酚化合物呢?那就想办法降低多酚化合物的极性,让它转变为弱极性或非极性的,这样就可以吸附在色谱柱固定相位点上。酸性条件(pH 2-3)抑制多酚电离,减少极性,增强保留。多酚分子中有苯环结构,还有π电子跃迁体系,在280nm处能有比较强的紫外吸收。
流动相的话,一般就常用乙腈-0.1%磷酸水(pH 3.0),或甲醇-0.1%磷酸水,普通C18柱pH需≥2,防止硅胶基质水解。复杂多酚混合物常需梯度洗脱(如乙腈-磷酸水线性梯度)以提高分离度。