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槲皮素含量测定

2026-01-15

槲皮素是从植物中提取出来的一种黄酮类化合物,具有抑制炎症因子释放,抗氧化,保护心血管,调节免疫等作用。槲皮素主要来源包括红酒(酒中有葡萄,葡萄皮和籽中都含有相对较高浓度的槲皮素),洋葱(尤其是红皮洋葱和紫皮洋葱,槲皮素含量还是很可观的),苹果皮,羽衣甘蓝,黑豆,茶叶(绿茶、白茶和黑茶等)。

槲皮素的化学结构中有两个苯环(A环和B环)通过杂环吡喃环(C环)连接而成的,分子中含有酚羟基(A环的3-OH和5-OH,B环的3-OH和4-OH,C环的7-OH)、羰基(C环的4-羰基)、碳碳双键(C环的2,3位双键)。槲皮素几乎不溶于水,却易溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯等极性有机溶剂。槲皮素有三个主要的共轭芳香环构成刚性平面结构,疏水区域远大于5个酚羟基的亲水面积,5个酚羟基形成的是分子内氢键,无法有效进行亲水,整体表现为疏水性。

高效液相色谱(HPLC)测定槲皮素含量,采用C18反相色谱柱,吸附槲皮素分子,柱温30℃。以甲醇和水为流动相,如果同时测多种组分,可用梯度洗脱的方法。如果只测槲皮素,也可以通过了解流动相的比例,选择等度洗脱。如果出峰比较多,且比较靠近,还是要用梯度洗脱。具体可参考相关的文献,更要结合样品的实际情况。看出峰情况,可加入0.1%磷酸溶液作为缓冲液,以保持良好的峰形。紫外检测器,波长370nm。流速和进样量,跟色谱柱的规格有关。比如,250mmx4.6mm,5um的柱子,推荐的进样量10ul,流速1ml/min。

提取样品中槲皮素的方法,先粉碎成末,溶解在80%甲醇水,超声和离心。如果浓度比较低,可通过氮吹的方式浓缩,再用0.45或0.22um膜过滤,待测。槲皮素易降解,需避光保存。精密称取槲皮素的标品,放入5mL棕色容量瓶中,然后加入适量甲醇超声溶解。用甲醇定容至刻度线,摇匀、使之成为1mg/mL的单标储备液,-20℃保存。再精确移取各个单标储备液0.5mL于5mL棕色容量瓶中,用80%甲醇水定容至刻度线,摇匀,使之成为0.1mg/mL的混合标准中间液,-20℃保存。


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