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β谷甾醇含量检测方法

2026-01-12

β谷甾醇主要来源于植物油(如大豆油、玉米油、菜籽油),杏仁等坚果类食物,全谷物(如燕麦、糙米、全麦面包),中药材(如柴胡、人参、黄芪),大豆、部分蔬菜(如牛油果、西兰花、菠菜)等。β谷甾醇的主要官能团有羟基(-OH),碳碳双键(C=C)和烷基侧链。其中,烷基侧链是长链烷基结构,增强其脂溶性和生物膜的渗透性。碳碳双键是甾醇环结构中的特征键,影响其化学稳定性和生物活性。羟基是甾醇分子中的核心官能团,赋予其亲水性和反应活性。β谷甾醇具有抑制胆固醇在肠道的吸收,降低血液中的胆固醇含量。

虽然分子结构3位有羟基基团,但分子中整体缺乏强极性基团,极性特征不明显。它的核心结构是由4个稠合环构成的,整体疏水性强,表现为非极性化合物。检测β谷甾醇的含量,可以根据样品的类型选择高效液相色谱(HPLC)或气相色谱(GC)。HPLC的分离效率高,C18反相色谱柱能有效分离β谷甾醇和结构类似的豆甾醇、菜油甾醇。而β谷甾醇的紫外吸收波长一般在205-210nm,甲醇的截止波长为205nm容易产生干扰,乙腈的截止波长低到190nm,可以用乙腈作为流动相。还有另外一种方法,就是采用气相色谱(GC)或气相质谱联用(GC-MS)。

采用气相色谱测定β谷甾醇,需要将样品进行皂化处理,如取0.1g样品,用2mol/L的KOH乙醇溶液,85℃水浴皂化1h,冷却后加入1ml的饱和氯化钠溶液。加入5ml石油醚,振摇静置分层。有机层是有用的,转移到新的离心管中,可重复两次合并后用超纯水洗涤,直到水层为中性(可用pH试纸),向有机层添加无水硫酸钠去除多余的水分,将全部有机层在35℃氮气吹干,用1ml的正己烷,涡旋混匀,过0.22um的膜。标准品是用乙酸乙酯超声溶解,用正己烷定容到刻度,并梯度稀释六个浓度点。

气相色谱的条件主要是靠氮气作为载气,将样品从色谱柱进入检测器。检测器用氢火焰离子检测器(FID),空气和氢气燃烧产生高温,将样品进行离子化。氢气和空气的比例一般是1:10的,如H2的流量为30ml/min,空气流量为300ml/min,确保有充足的氧气燃烧。另外,氮气和氢气的比例是1:1,也就是30ml/min。检测器的温度比较关键,燃烧的充分,信号就会比较强且稳定,比如320℃。色谱柱采用HP-5(30m× 0.32mm×0.15μm),程序升温,初始温度如60℃,以10-15℃/min的速率升到280℃停留5min,以5℃/min升到300℃保持2min。就是要测哪个物质,就要看它的化合物沸点,在这个温度下停留几分钟。进样量1uL,分离比可用10:1(根据出峰的情况进行调整),流量用2.5ml/min。


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