天然的呈味核苷酸主要包括5-肌苷酸(IMP),5-鸟苷酸(GMP),5-腺苷酸(AMP),5-黄苷酸(XMP),5-胞苷酸(CMP)。其中,IMP和GMP的鲜味是比较显著的。这些核苷酸广泛存在天然食物中,比如肉类、海鲜、香菇等,它们呈味的效果和特定的化学结构密切相关。
提取食物中的呈味核苷酸,主要包括直接煮沸法、酶解法、化学提取法等。其中,化学提取法又包括了碱法、盐热法和盐碱热法等。这种方法是通过特定的化学试剂来破坏细胞结构,释放出核苷酸,在通过离心沉淀等方法来获得。
液相色谱测呈味核苷酸含量,前处理采用高氯酸(HClO4)来提取。高氯酸能够水解磷酸二酯键,将结合态的核苷酸转化为游离态,确保目标组分能够全部释放出来。同时,较低的pH值能有效抑制样本中的核酸酶活性,防止提取过程中核苷酸被降解。另外,高氯酸通过质子化作用让蛋白质变性,形成不溶性沉淀,从而和可溶性的核苷酸分开。之所以采用高氯酸,主要是它的极强的酸性和氧化性,且能提供大量的质子(H+),这些质子会攻击磷酸二酯键中的氧原子,使其质子化,削弱并最终断裂磷氧键(P-O)。同时,高氯酸的氯原子处于高氧化状态(+7),可加速水解反应。
将样品粉碎,称取2g,加入5ml的2.5%的高氯酸,在4℃低温超声30min,将样品中的核苷酸全部释放出来。用4000r/min离心10min,取上清转移到另外一个离心管。再按这个步骤,重新提取一次,合并两次上清液。用50%的KOH水溶液,调节到pH=6.5左右,用纯水定容至20ml,摇匀过0.45um,待测。呈味核苷酸在pH 6.5时稳定性较好,这是稳定的pH范围之一。液相色谱测定条件,采用C18的色谱柱,250mmx4.6mm,5um;柱温30℃。DAD检测器,波长260nm;流速0.8-1ml/min,0.05mol/L磷酸二氢钾为流动相,进样量10-20ul。