花色苷是一种黄酮类化合物,它的化学结构是以C6-C3-C6为骨架的2-苯基色原烯。花色苷中间含有多个羟基和羰基,是一种极性较强的化合物,易溶于水和甲醇等极性溶剂,不溶于非极性的油脂等。花色苷在酸性条件下,以红色黄烊盐形式存在,水溶性比较好;在中性条件下,转化为无色的,溶解度降低;在碱性条件下,形成蓝色的醌式碱,易沉淀,溶解度很低。
在自然界中,花色苷常常以糖苷形式存在,比如矮牵牛素-3-葡萄糖苷,它们对pH值比较敏感。根据苷元不同,主要分为矢车菊素、天竺葵素、飞燕草素、芍药色素、矮牵牛素、锦葵色素。糖基有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖等,连接在C3、C5等位点。含有花色苷的食材有很多,比如黑枸杞、紫玉米、紫薯、蓝莓、桑葚、黑米、紫甘蓝、黑豆、紫豇豆等。从功能上来讲,基本上具有抗氧化、抗炎、改善代谢和视力等生物活性。
检测花色苷的方法,实验室常采用高效液相色谱(HPLC)法、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)、分光光度法等。以HPLC为例,植物组织中的花色苷是溶解于水和甲醇的,可以用50%的甲醇超声提取,离心后净化处理,比如C18固相萃取柱净化,去除脂质等物质。花色苷的极性较强,可通过加0.1%甲酸的方法来增强C18的色谱柱保留。且只有在酸性的条件下,花色苷的溶解度是较高的,如果pH值向碱性发生了变化,比较容易产生沉淀。C18色谱柱的pH值耐受范围一般是2-8,不能超过这个应用范围。
如果用C18的250mmx4.6mm,5um的柱子,推荐流速为1ml/min,进样量10ul。如果是用UPLC或LC-MS/MS测定含量,就要用短一点的柱子,比如C18,2.1 mm*100 mm,1.7 µm,流速就要降低,比如0.35ml/min,进样量2ul。检测器就用紫外检测器,花色苷的检测波长520nm,也可以重新进行扫描确定特征波长。柱温的话,先用室温,根据出峰的特点进行微调。