儿茶素是茶叶中的主要活动成分,属于黄烷-3-醇类化合物,具有2-苯基苯并吡喃的结构,根据B环和C环上取代基的不同,儿茶素可分为多种单体。不同的结构特点,决定了对应不同的生物活性。
常见的儿茶素单体有8种,其中包括非酯型儿茶素(表儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、没食子儿茶素)和酯型儿茶素(表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯)。它的基本结构是有A、B、C三个环组成,C环为吡喃环,可能以椅式构象存在。儿茶素和表儿茶素是立体异构体,差异就在于2,3位取代基上的顺反构型。儿茶素是茶多酚的主要成分,通常用有机溶剂(如甲醇、乙醇等)提取。

液相质谱测定样品中儿茶素的含量,通常要做好前处理。茶叶的样品一般是研磨粉碎后存储在-20℃冰箱中,因为儿茶素在高温下会发生氧化降解反应。另外,光照尤其是紫外线会引发儿茶素的光化学反应,导致结构破坏。因此,长时间暴露于强光下会加速降解。儿茶素能和金属离子(如铁、铝)发生络合反应,生成有色络合物。在称量的过程中,称取若干样品,精确到0.0001g,放入适当的棕色离心管中。用70%甲醇来溶解提取,混合2min后用超声提取,浸提液用10000r/min离心得到上清液,转移到新的棕色容量瓶中,用70%甲醇补充并定容到刻度,比如10ml。混匀后,用0.22um的滤膜过滤。

采用适合串联质谱的液相色谱柱,比如C18 2.1*50mm 1.8μm,流速为0.3ml/min,进样量1-2ul,短小的细柱具有更强的分离能力,可以将样品中的多种儿茶素逐步分离出来。流动相就用乙腈和超纯水,化合物的种类比较多,用梯度洗脱来完成分离。反相色谱柱,从高比例的水相开始,比如0-1min,95%的水相和5%的乙腈开始,1-3min用40%水相和60%乙腈,3-4min用5%水相和95%乙腈,4-5min恢复到95%水相和5%乙腈。

设置质谱的参数也是比较关键的,儿茶素是极性化合物,这里采用的离子模式是ESI+模式。离子源温度450℃,喷雾电压5000-5500V,气帘气35arb,碰撞气7arb,离子源气体Gas1为40arb,Gas2为50arb。MRM模式,定量测8种儿茶素,就用8个对应物质的离子对,比如C的291.1/139.1,EGC的307.2/139.2,GC为307.2/139.1,EC为291.2/139.0,EGCG为459.2/139.1,GCG为459.2/138.9,ECG为443.3/122.9,CG为443.2/123.2。标准曲线,计算含量。