测定土壤中微生物量碳的方法是氯仿熏蒸浸提，将土壤样品放置在密闭容器中，利用氯仿蒸汽破坏微生物细胞膜，让细胞内容物（如碳、氮、磷）都释放到土壤中。熏蒸后，使用浸提剂（如0.5mol/L的K2SO4）提取土壤中释放出来的碳组分，通过测定浸提液中的全碳含量，一般用重铬酸钾氧化法或碳自动分析仪。计算熏蒸前和没有熏蒸时候的碳含量差值，通过转化系数（kec=0.45）估算出微生物量碳的含量。
测定步骤
1.采集新鲜的土壤样品，去除植物残体（如根、茎、叶）和动物（如蚯蚓、蚂蚁），过筛（孔径＜2mm）。手感湿润疏松但不结块为宜，将土壤放到密封的大塑料桶中，25℃条件下培养7-15d，桶内有适量的水保持相对湿度100%，并在桶内放一小杯1mol/L的NaOH溶液以吸收土壤呼吸产生的CO2。
2.称取新鲜土壤25g放入50ml的烧杯中，将烧杯放入真空干燥器中，放入盛有乙醇氯仿的烧杯2-3个，烧杯内放少量经过硫酸处理洗涤后烘干的瓷片，干燥器底部加入少量水以保持适度。用土壤熏蒸抽真空装置抽真空，在-0.07MPa真空下使氯仿剧烈沸腾3-5min，关闭真空干燥器阀门，放到25℃黑暗条件下熏蒸24h。经过熏蒸的土壤转移到另外一个干净的干燥器中，反复抽真空6次，每次3min，彻底去除土壤中的氯仿，一直到没有味道为止。
3.将熏蒸土壤无损地转移到125 ml聚乙烯提取瓶中，加入80 ml 0.5 mol L-1K2SO4，土水比为1 : 4（w : v），振荡（25℃，300 r min-1）浸提30 min，用中速定量滤纸过滤于125 ml塑料瓶中。在熏蒸开始的同时，另称取等量的3份不熏蒸土壤于125 ml聚乙烯提取瓶中，加入80 ml 0.5 mol L-1K2SO4同上浸提。同时做3个不加土壤的试剂空白。浸提液应立即分析，或在–18℃下保存。
4.取10 ml土壤提取液于40 ml样品瓶中（注意解冻的浸提液在取样前应彻底混匀），加入10 ml六偏磷酸钠溶液（pH 2.0），使提取液中的沉淀（CaSO4和K2SO4）全部溶解。采用Phoenix 8000碳–自动分析仪测定样液中的有机碳含量。先采用2 mm细管向样液中通入高纯度氮气5～10 min，先除去溶解在样液中的部分CO2，样液再进入无机碳排除管进一步排除残留的CO2。再进入紫外氧化室，在过硫酸钾溶液和磷酸溶液作用下样液中的有机碳全部氧化为CO2，产生的CO2经纯化后再通过红外检测器测定。
5.结果计算：
土壤微生物量碳：BC = EC / kEC
式中：EC = 熏蒸土壤提取的有机碳 – 不熏蒸土壤提取的有机碳
kEC为转换系数，取值0.45。