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微生物残体碳检测

2026-01-21

在微生物代谢活动中,微生物吸收了外源碳(如植物根系分泌物,凋落物分解产物)转化为自身生物量。当微生物死亡后,它的细胞结构并没有完全矿化,以残体形式残留在土壤中。微生物残体碳占土壤有机碳总量的30%-60%,深层土壤中的占比要高于表层。残体碳是微生物(包括细菌、真菌等)死亡后残留的细胞及其组分所形成的有机碳物质,主要分布于天然湿地、滨海湿地等生态系统中。

微生物残体碳在碳循环过程中其稳定作用,比如长期固碳,调节碳平衡。另外,残体碳可促进团聚体形成,提升土壤肥力。残体碳是土壤有机质的核心,能缓慢释放氮、磷等养分,提高土壤保水保肥能力,为植物生长提供基础。如何测定土壤中的微生物残体碳呢,通过把微生物残体拆解为特定的生物标记物(如氨基糖),用气相色谱或气相质谱联用(GC-MS)测定它们的含量,通过换算系数推算出总的残体碳含量。

采集新鲜的土壤,去除杂质,用强酸(6M的HCl)在高温下将土壤中的氨基糖聚合物水解(105℃水解8h)为单体。过滤,旋转蒸发,残留物溶解于蒸馏水。用0.4mol/L的KOH溶液调节pH值至中性(pH 6.8),4000r/min离心10min去除沉淀。上清液转移到衍生瓶中,用N2在45℃下吹干,加入蒸馏水溶解。衍生化处理,向衍生瓶中加入衍生试剂(4:1的吡啶-甲醇溶液,含有32mg·mL-1的盐酸胫胺和40mg·mL-1的4-二甲基氨基吡啶),加盖密封,在75~80℃条件下加热30min,其间振荡数次。 冷却至室温后,加入1mL乙酸酐,密封再次加热20min。冷却后加入1.5mL的二氯甲烷。再加入1mol·L-1的HCL溶液1mL, 激烈振摇30 s后,移走上层液体,与上述步骤相同,用1mL的蒸熘水至少洗涤3次,在最后一次洗涤过程中尽可能去除水相。剩余的有机相在45℃下用N2吹干后,用400 µL的乙酸乙酯-正已烷混合溶剂(V/V=1:1)溶解后转移至进样瓶中

精密称取一定量各个标准品于5mL棕色容量瓶中,然后加入适量超纯水(胞壁酸用甲醇)超声溶解后用超纯水(胞壁酸用甲醇)定容至刻度线,摇匀、使之成为1mg/mL的单标储备液。标准工作曲线用乙酸乙酯-正已烷混合溶剂(V/V=1:1)配置成相同体积后加入同等含量的内标。气相色谱测定,采用FID检测器,温度250℃;进样口温度250℃。HP-5的色谱柱,30mx0.32mmx0.15um。H2和N2流量为30ml/min,空气流量300ml/min,分流比5:1。程序升温 初始温度 120℃保持 1min,然后以 10℃/min 升到220℃,保持12min,以40℃/min 升到300℃,保持 3min。进样量1uL,流速1ml/min。


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