环磷酸腺苷(简写为cAMP)是细胞内的第二信使,由ATP经过腺苷酸环化酶催化而成。cAMP主要来源于金丝小枣和灰枣、另外在红枣、卵枣、骏枣、圆铃枣等也有发现。主要应用于医学领域研究,具有调节细胞代谢,免疫应答,抗逆反应等生理特点。
从化学结构上来看,cAMP由腺嘌呤、核糖和磷酸基团组成的环状核苷酸。3,5-环磷酸酯键是cAMP的骨架结构,在核糖上的3-羟基和5-羟基参与形成环状结构,腺嘌呤环上还有氨基存在,带负电的磷酸基团也非常有用,它参与细胞信号的传导(磷酸基团通过形成环状结构,激发蛋白激酶A传递信号)。首先,是要激活腺苷酸环化酶,催化ATP生成cAMP。cAMP上的磷酸基团和核糖3,5-位羟基形成环状结构,稳定分子并增强和PKA的结合能力。cAMP结合PKA的调节亚基,释放催化亚基,磷酸化下游靶蛋白,调控代谢。
cAMP的结构中含有磷酸基团和羟基等极性基团,让这个物质具有了亲水的特点。另外,环状的腺苷酸骨架中的碳氢链部分,则具有了疏水的能力。因此,它既具有了极性,又含有非极性,可用C18的色谱柱来吸附,用乙腈和水来做流动相来洗脱。cAMP是弱酸性的,它的磷酸基团pKa值大约在6-7之间,在环境pH7.4时会发生部分解离,以阴离子形式存在。因此,要调节流动相的pH值4.5左右(0.05mol/L的磷酸二氢钾),防止出现解离,保持良好的峰形。cAMP是偏极性的,因此它的出峰应在偏水相的,也就是水相的比例要大一些,如乙腈和水15:85。
用C18反相色谱柱,250mmx4.6mm,5um的规格。推荐1ml/min的流速,10-20uL的进样量(根据出峰的情况,适当调整),检测器用紫外的就行,在258nm或附近有强的吸收峰特征,柱温30℃可明显提高分离效率和重现性。