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二磷酸尿苷葡萄糖含量检测

2025-08-22

二磷酸尿苷葡萄糖,是一种糖核苷酸,可以缩写为UDPG。它在人体内,是由尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶催化而成的。这种化合物广泛的分布在植物、动物和微生物中,为蔗糖,淀粉等多糖提供葡萄糖基。在单糖的互变,生成糠醛酸的时候,可以作为重要的中间产物。

实验室的检测方法,包括有高效液相色谱(HPLC)和酶联免疫吸附(ELISA)。

1.HPLC

要想分离出样品中的化合物UDPG,就要先通过物理和化学的方法,将样品粉碎,过筛,溶入有机溶剂,超声,离心,过滤等。尽可能的提取出来,以供检测。这个时候,就要考验基本功底了。同时,能不能测出来,也是看预处理的提取过程是否合理。比如,在5℃的条件下,高速离心10min,取上清液用0.45um膜过滤。

色谱条件:通过合适的色谱柱和流动相,将样品中的UDPG分离并洗脱出来,通过DAD检测器可检测低浓度目标物。具体参数,需要根据实际情况进行开发或验证,以获得较有效的色谱峰,便于后续的标准曲线和定量计算。

2.ELISA

基于双抗体夹心法:将纯化的UDPG捕获抗体包被于微孔板,加入待测样本后形成抗原-抗体复合物,再与HRP标记的检测抗体结合。通过底物TMB显色,颜色深浅与UDPG浓度成正比。

按说明书的操作步骤进行,显色反应完成后,用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本中UDPG的具体含量。


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