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dATP的检测方法

2025-08-20

dATP是脱氧腺苷三磷酸的简写,它的化学结构和ATP是相似的,只是少了一个五碳糖2号碳上的-OH,取而代之的是一个单独的氢原子。从结构上来看,dATP是由一个脱氧核糖,磷酸和腺嘌呤组成的。在NDA复制的过程中,DNA聚合酶利用dATP作为原料,通过磷酸二酯键连接起来,形成DNA链。

检测样品中dATP含量的方法,包括高效液相色谱(HPLC),毛细管电泳(CE),液相色谱质谱联用(LC-MS),酶联免疫吸附(ELISA)法。以HPLC为例,简单的介绍一下检测流程。

1.样品处理

将含有dATP的样品进行溶解,稀释,过滤,有机溶剂的萃取,衍生化处理,待测。

2.色谱条件

如C18色谱柱(250*4.6mm,5um),柱温30-40℃;甲醇和0.1%磷酸溶液(pH2.5)梯度洗脱,流速1ml/min。紫外检测器,波长260nm,进样量10uL。

3.标准曲线

将标准品进行溶解和稀释,用流动相有机溶剂梯度稀释6个浓度并记录。通过HPLC依次测出对应的色谱峰,记录保留时间和峰面积。对峰面积进行积分,对应到它的标准溶液浓度,绘制标准曲线,得到回归方程,相关系数r2>0.999。

4.样品测定和计算

对样品也进HPLC测定它的色谱峰,在保留时间的地方找到目标峰,记录色谱峰面积。对面积进行积分,代入到回归方程,可以计算出样品中的dATP含量。同时,也需要考虑到回收率,线性范围,检出限,重复性等。


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