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长链脂肪酸的检测方法

2025-08-19

长链脂肪酸是指碳链上的碳原子数超过12的脂肪酸,通常是指12到24个碳原子。长链脂肪酸根据碳链是否含有双键,以及双键数量的多少,分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。比如EPA,DHA,油酸,棕榈酸,亚油酸,花生四烯酸,α-亚麻酸等。长链脂肪酸是重要的能量来源,构成细胞膜,维持它们的流动性和稳定性,合成激素和信号分子,如果过量摄入饱和脂肪酸,会提高胆固醇水平,增加心血管疾病的风险。

检测方法:气相色谱(GC)法或气相质谱联用(GC-MS)法。

1.样品处理

称取一定量的样品,加入正己烷,CH3OH-KOH混合振荡,并进行甲酯化30min,取出4000r/min离心10min,0.22um膜过滤。

2.色谱条件

DB-23 检测脂肪酸的专用色谱柱,长度30m,内径0.25mm,膜厚0.25μm。以N2为载气,N2和H2的流量为30ml/min,空气流量为300ml/min,分流比50:1。进样口温度250℃,氢火焰离子检测器,280-300℃。色谱柱程序升温,初始温度 50℃保持 1min,然后以 25℃/min 升到175℃,保持 0min,以 4℃/min 升到230℃,保持 10min流量:1.3ml/min,进样量: 1μL。

3.标准曲线

将要测的标准品进行溶解配制成标准母液,梯度稀释成6个浓度点,比如5倍的梯度。进样到气相色谱,通过色谱峰面积和对应的浓度,拟合出标准曲线,得到回归方程,相关系数1>R2>0.999。

4.样品测定

进样到气相色谱,通过标准色谱峰的保留时间,可以识别出目标色谱峰。对峰面积进行积分,并代入到回归方程,可计算出样品溶液中的对应的长链脂肪酸含量。


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