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三七皂苷R1含量测定方法

2025-08-19

三七皂苷R1主要来源于中药材三七的干燥根茎,属于达玛烷型的四环三萜类皂苷化合物,分子结构相对复杂。在药理学研究方法,具有保护心血管,抗氧化,抗炎,调节免疫,保护神经等作用。化学式为C47H80O18,分子量933.13,溶解于甲醇、乙醇、DMSO和热水,不溶于乙醚、氯仿和苯等。

检测方法:高效液相色谱(HPLC),液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)等。

1.样品处理

称取样品粉末(过四号筛)0.6g,并加入50mL甲醇到具塞容量瓶中。称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,0.22um膜过滤,待测。

2.色谱条件

C18色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径,柱温25℃。紫外检测器,波长203nm。进样量10-20uL,流速1ml/min。以乙腈和水为流动相,梯度洗脱。

3.标准曲线

取三七皂苷R1的标准品适量,精密称量,并加入70%甲醇溶解并稀释成2.5mg/ml。梯度稀释5-7个点,有的时候是成倍的,比如2倍或5倍,尽可能覆盖到样品溶液的范围。最低点一般是定量限,通过信噪比的10倍可以得到。进样到HPLC,测定出各个浓度点的色谱峰。记录色谱峰的保留时间,并对标品的色谱峰面积进行积分处理。对应峰的标准溶液浓度,可拟合出标准曲线,得到回归方程。

4.含量计算

将样品溶液进样到HPLC中,根据保留时间,找到三七皂苷R1的色谱峰。对这个色谱峰的面积进行积分处理,代入到回归方程,可计算出样品溶液中的三七皂苷R1含量。


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