环二鸟苷酸（c-di-GMP）是由鸟苷三磷酸在二鸟苷酸环化酶的作用下环化而形成的，这个反应的过程还需要有Mg2+作为辅助因子，以确保反应酶的活性。c-di-GMP作为细菌中的第二信使分子，参与调节多种生理功能，比如细胞分化，生物被膜形成，致病因子产生等。它的作用机制是通过二鸟苷环化酶（DGC）合成和磷酸二酯酶（PDE）的降解途径进行调控的。c-di-GMP的化学式为C20H24N10O14P2，分子量为690.41。
检测方法：高效液相色谱（HPLC）法，液相色谱质谱联用（LC-MS），酶联免疫吸附（ELISA）法等。以HPLC为例，简单的介绍一下检测流程。
1.样品处理
根据样品中种类，如血清，血浆，细胞上清，组织匀浆等。采用不同的方法，去除杂质，超声，离心，膜过滤，待测。具体操作过程和方法，需参考相关的标准、文献或开发出来。
2.色谱条件
常规的C18反相色谱柱，250mmx4.6mm，5um，柱温25℃；紫外检测器，波长253nm；以乙酸铵和乙酸铵甲醇为流动相，梯度洗脱，流速0.8-1ml/min，进样量10-20uL。仅供参考，需要重新验证或调整参数，获得适合实际环境情况的较佳条件。
3.标准曲线
将c-di-GMP的标准品用水进行溶解和稀释，配制成标准母液，记录它的浓度值。然后，梯度稀释5-7个点，可以成倍的进行，确保覆盖到样品溶液中的目标化合物可能浓度范围。最低点一般是在定量限，以信噪比（S/N）的10倍确定。依次进样到HPLC中，测出各个点的色谱峰，记录它的保留时间。对各个峰的峰面积进行积分处理，并结合它的浓度，拟合出标准曲线，得到回归方程。
4.含量计算
样品溶液进样到HPLC中，在软件中记录色谱峰。由于样品是复杂的，没有标品那么纯正，因为可能会出现杂峰。根据标准色谱峰的保留时间，找到样品中目标色谱峰的位置，并对它的峰面积进行手工或自动积分处理。将样品的c-di-GMP的色谱峰面积代入到回归方程，可计算出样品溶液中的c-di-GMP的含量。