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高效液相色谱测定瓜氨酸的含量

2025-08-18

瓜氨酸是一种非蛋白氨基酸,主要存在西瓜、甜瓜、南瓜等葫芦科植物果实中。研究瓜氨酸有比较重要的意义,比如去除-COOH,增加NO合成精氨酸;增强免疫,改善某个方面的能力,维持心肺的正常进行,让人放松身心,不至于很疲劳的样子。

前处理(水解+衍生):将0.4ml的样加入到1.5ml离心管,加入0.4ml的0.25%高氯酸沉淀蛋白,振荡5min,13000r/min离心20min。取0.5ml上清放入15ml棕色离心管,加入pH9.0的碳酸氢钠缓冲液和DNFB衍生剂各0.5ml,在60℃水浴避光反应60min。冷却到室温,加入3.5ml的pH7.0的磷酸缓冲溶液,混匀避光15min。0.22um膜过滤,待HPLC上机测定。

色谱条件:C18的色谱柱,250*4.6mm;5μm,A:乙腈:甲醇=90:10 B:0.02mol/L 磷酸二氢钠+磷酸氢二钠为流动相,梯度洗脱。VWD检测器,波长360nm。流速为1ml/min,柱温38℃,进样量20uL。

标准品用 PH=7 的磷酸盐缓冲液溶解定容,使之成为 1mg/mL的单标储备液,梯度稀释6个浓度点。标准曲线是一个由横纵坐标轴和一条近似于直销的曲线组成的,横坐标为各个标准溶液的浓度值,纵坐标是峰面积值。标准曲线是串联了6个点,并经过坐标轴的原点。得到一个回归方程,相关系数1≥r2≥0.999,重复性RSD≤2%。

另外,还可以测22种氨基酸。


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