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多巴胺含量测定方法

2025-08-18

多巴胺是一种内源性的含氮的有机化合物,又名儿茶酚乙胺,简称DA。它是酪氨酸在代谢的过程中,经二羟苯丙氨酸所产生的中间产物,分子式为C8H11NO2。多巴胺是最简单的儿茶酚胺,含有苯乙胺结构,也是苯乙胺的衍生物。多巴胺有多种代谢途径,但最终的产物是没有生物活性的高香草酸,随着血液经肾脏滤出,随着尿液排出体外。它在中枢神经系统中起着关键的调节作用,可以通过结合并激发细胞表面受体来发挥作用。多巴胺在脑内充当神经递质和神经调节剂,受所有单胺类神经递质共有的机制控制。

多巴胺还是一种重要的神经递质,在植物中广泛存在。它主要分布在植物的根、茎、叶和果实等组织中,参与植物的生长发育,以及对环境胁迫的响应和调控植物免疫系统的活性,比如抗氧化、抗菌、抗逆性等。

检测多巴胺含量的方法,主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)、酶联免疫吸附法等。

以气相色谱法(GC)为例,仅供参考。

测定原理:利用样品中多巴胺分子和气相色谱柱之间的物理和化学作用,对多巴胺进行分离,并通过检测器测定其含量。

色谱条件:采用高纯氦气为载气,初始柱温设置为80℃,并以一定的速率升温到200℃,并保持一段时间。进样量一般为1uL左右,常用的是热导检测器(TCD)或火焰离子化检测器(FID)。一般采用不分流进样。

样品处理:称重后,加入组织裂解液,在1.5mL离心管中充分匀浆。超声波2次,在14000rpm离心15min。取上清,重新离心一次。再取上清液,保存-80℃。取出来,等融化后,再次离心,过0.2um的耐酸过滤器。

色谱检测:以上述的色谱条件,进样到气相色谱中,记录色谱峰和数据。制作标准曲线,计算回归方程,确保相关系数和重复性、精密度符合要求。标准曲线是通过一系列已知浓度的标准溶液进行测定,然后根据浓度和响应值的关系绘制而成的。在气相色谱分析中,通常使用外标法来建立标准曲线。首先,准备一系列不同浓度的标准品,并上机测定色谱峰。根据浓度和峰面积的关系,绘制标准曲线,计算回归方程。根据对样品的测定色谱峰,结合回归方程,可以计算出样品中的多巴胺含量。


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